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請下載資料查看詳細方法 水質(zhì) 蛔蟲卵的測定 沉淀集卵法 蛔蟲卵測定適用范圍： 本標準規(guī)定了測定水中蛔蟲卵的沉淀集卵法。 本校準適用于地表水和廢水中的蛔蟲卵測定 當取樣體積為10L時，本方法的檢出限為5個/10L（注：不銹鋼開口直壁容器應(yīng)選擇10L帶刻度） 規(guī)范性引用文件 本標準內(nèi)容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本適用于本標準。 HJ/T 91地表水和污水檢測技術(shù)規(guī)范 方法原理： 沉淀集卵法主要通過樣品的濃縮、雜質(zhì)分離 配套試劑和材料： 分析時請使用符合國家標準的分析純化學試劑，試驗用水為新制備的蒸餾水或者去離子水 一：乙酸乙酯（C4H8O2） 二：乙酸-乙酸鈉緩沖液：PH=4.5 稱取15.0g三水合乙酸鈉(CH3COONa3H2O) 三：吐溫80溶液: q (C24H4O6) =1 %o 移取1ml吐溫80(Tween80)，用實驗用水稀釋定容至1000ml,臨用現(xiàn)配。 四：飽和硝酸鈉(NaNO3) 溶液 稱取略多于實驗環(huán)境溫度對應(yīng)溶解度的硝酸鈉(NaNO3),充分溶解于100g實驗用水中，用濾紙濾去殘渣，臨用現(xiàn)配。硝酸鈉在不同溫度下的溶解度見附錄A。 配套儀器和耗材： 分析時如有量器請使用符合國家標準的A級量器 一：顯微鏡：物鏡4x、10倍，目鏡10x倍 二：冰箱：0℃-4℃ 三：水平轉(zhuǎn)子離心機：帶50ml螺口尖底離心管，離心力1000g以上 四：漩渦混合器 五：篩網(wǎng)：60目 ，孔徑250um 六：不銹鋼開口直壁容器10L（帶刻度 七：開口直壁量筒：1000ml A級 八：虹吸管 九：洗瓶 十：螺口尖底離心管50ml 十一：一次性巴氏滴管3ml、10ml 十二：微移液器：1000ul 十三：定量計數(shù)框：1ml網(wǎng)格、5ml型 樣品： 按HJ/T 91中對一般污染物采樣的要求 分析步驟： 一：過濾 充分搖勻樣品，轉(zhuǎn)入不銹鋼開口直壁容器至10L刻度 二：沉淀 上述樣品在15 C~25 C室溫下靜置過夜沉淀12 h~24 h,用虹吸管小心吸取并棄去上清液 注1:若樣品中蛔蟲卵濃度在10倍檢出限以上(>50個/10L),采樣時 離心： 沉淀濃縮后的樣品(7.2) 小心轉(zhuǎn)移至3個螺口尖底離心管 用少量吐溫80溶液將3個離心管中的沉淀進行懸浮 脂類雜質(zhì)分離去除： 用與離心后沉淀等體積的乙酸-乙酸鈉緩沖液對沉淀進行懸浮(即:離心后沉淀體積為2 ml,加入2ml緩沖液。如果離心后沉淀體積不足2ml,加入緩沖液至4 ml 加入2倍離心后沉淀體積的乙酸乙酯，用渦旋混勻器*混合 將上層和中間層液體平穩(wěn)傾出棄去 鏡檢： 加入5倍底層沉淀(7.4)體積的飽和硝酸鈉溶液，對分離去除脂類雜質(zhì)后的含卵底層沉淀進行懸浮 鏡檢時，需保持環(huán)境條件的穩(wěn)定 空白對照試驗： 取10L同批次試驗用水 結(jié)果計算于表示： 計算結(jié)果： C------水樣中蛔蟲卵濃度（個/10L） N-----檢測到的所有蛔蟲卵數(shù)（個） Q-----實際水樣體積（10L） 結(jié)果表示： 水質(zhì)中蛔蟲卵的測定，實驗終結(jié)果取整數(shù) 精密度： 6家實驗室分別對實際樣品和低濃度(20 個/10L) 質(zhì)量保證和質(zhì)量控制： 每批次樣品至少做1個全程序空白實驗，并取10%的樣品進行平行樣測定 廢物處理： 實驗中虹吸液煮沸10min后可按普通廢棄物處理，含乙酸乙酯的廢棄液應(yīng)集中保管，委托有資質(zhì)的單位進行處理。 注意事項： 實驗用過的器具均需進行高溫滅活，置于水中煮沸10min后方可再次使用。 實驗操作人員要注意自身防護，試驗時要穿戴工作服、乳膠手套、及口罩等，同時還要避免蛔蟲卵的樣品污染實驗室環(huán)境。 附錄A 硝酸鈉水中溶解度、離心機離心力及轉(zhuǎn)速計算公式 A.1 硝酸鈉在水中的溶解度 表A.1 硝酸鈉水中溶解度 溫度（℃） 溶解度（g） 0 73 10 80 20 87 30 95 40 103 A.2離心力計算公式： 附錄B 蛔蟲卵的檢定 B.1蛔蟲卵的形態(tài)特征 B.1.1受精蛔蟲卵 蟲卵呈短橢圓形，大小為45 μm~75 μmx35 μm~ 50 μm。卵殼很厚，自外向內(nèi)分為三層:受精膜、殼質(zhì)層和蛔甙層，殼質(zhì)層較厚，另兩層極薄，在普通顯微鏡下難以分清。卵殼內(nèi)有一個大而圓未分裂的受精卵細胞，與卵殼間常見有新月形空隙。卵殼外有一層由蟲體子宮分泌形成的蛋白質(zhì)膜，其表面凹凸不平呈波浪狀。隨糞便排出的蟲卵常被膽汁染成黃色或棕褐色。 B.1.2未受精蛔蟲卵 蟲卵呈長橢圓形或不規(guī)則形，大小為88 μm~94 μmx39 μm ~44 μm B.1.3感染期蛔蟲卵 卵內(nèi)含有一.條卷曲的幼蟲 B.1.4蛋白質(zhì)膜脫落的蛔蟲卵 若蛔蟲卵的蛋白質(zhì)膜脫落 B.2蛔蟲卵參考圖片 B.2.1蛔蟲卵模式圖 B.2.2發(fā)育各階段的蛔蟲卵 附錄C 蛔蟲卵配置樣品的制備 豬蛔蟲(Ascaris suum)活成蟲采集自屠宰場 制備蛔蟲卵備用液時，選取2~3條雌性蛔蟲，用75 %乙醇消毒過的解剖刀，劃開蟲體，每條蛔蟲一- 對子宮選取靠近陰門的一段(2 mm~3 mm),解剖后，將含蛔蟲卵的內(nèi)容物及組織碎片放入50ml離心管中，加入數(shù)顆直徑1mm玻璃珠及10ml生理鹽水，混勻后于渦旋混勻器振蕩3min~5min,用260目網(wǎng)過篩，取40ml生理鹽水分數(shù)次沖洗離心管和篩網(wǎng)，此時獲得的濾液中蛔蟲卵呈單個狀態(tài)存在。濾液加入甲醛至終濃度為4%，0 C~4 C保存?zhèn)溆?div id="d48novz" class="flower left"> 制備配制樣品時，搖勻蛔蟲卵備用液，用1000 μ1微量移液器，立即吸取適量的蛔蟲卵備用液于1ml定量計數(shù)框(網(wǎng)格)中，計數(shù)后用250μl微量移液器向計數(shù)框中添加或移出蛔蟲卵至所需數(shù)量。將計數(shù)框中所有的液體用吐溫80溶液沖洗入配制樣品中。再在顯微鏡下檢測計數(shù)框，確保無蛔蟲卵殘留。 |
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